人乳腺成纖維細(xì)胞是乳腺組織微環(huán)境中的關(guān)鍵間質(zhì)細(xì)胞，參與乳腺發(fā)育、組織修復(fù)及腫瘤微環(huán)境調(diào)控。人乳腺成纖維細(xì)胞試劑盒為科研人員提供了原代細(xì)胞株、專(zhuān)用培養(yǎng)基與配套試劑，大大簡(jiǎn)化了細(xì)胞培養(yǎng)流程，成為乳腺生物學(xué)、腫瘤研究與藥物篩選的重要工具。
第一步：準(zhǔn)備工作與環(huán)境消毒
在生物安全柜內(nèi)操作，提前開(kāi)啟紫外燈照射30分鐘。實(shí)驗(yàn)人員需穿戴無(wú)菌手套、實(shí)驗(yàn)服與口罩。將水浴鍋預(yù)熱至37℃，CO2培養(yǎng)箱設(shè)定為37℃、5%CO2、飽和濕度。檢查試劑盒內(nèi)各組分是否齊全、未過(guò)期。
第二步：細(xì)胞復(fù)蘇與接種
從液氮罐中取出凍存管，立即放入37℃水浴中快速搖晃融化（1-2分鐘），避免冰晶緩慢解凍損傷細(xì)胞。用75%酒精消毒管壁，轉(zhuǎn)入生物安全柜。將細(xì)胞懸液緩慢轉(zhuǎn)移至含5-10mL預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5分鐘，棄上清。用新培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種于預(yù)先包被的T25或T75培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱。
第三步：培養(yǎng)基配制與更換
試劑盒通常提供基礎(chǔ)培養(yǎng)基與專(zhuān)用添加劑（如生長(zhǎng)因子、血清、抗生素）。按說(shuō)明書(shū)比例無(wú)菌混合，配制成培養(yǎng)基，4℃避光保存，建議2周內(nèi)用完。細(xì)胞貼壁后（約24小時(shí)），換液去除殘留DMSO；此后每2-3天更換一次培養(yǎng)基，觀察細(xì)胞形態(tài)與密度。
第四步：細(xì)胞傳代與擴(kuò)增
當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代。棄培養(yǎng)基，用無(wú)菌PBS輕柔洗滌一次。加入適量胰酶-EDTA溶液，37℃孵育1-3分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓、脫落。加入含血清培養(yǎng)基終止消化，吹打均勻，按1:2至1:4比例傳代至新培養(yǎng)瓶。
第五步：細(xì)胞凍存與長(zhǎng)期保存
選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按上述方法消化、離心。用細(xì)胞凍存液（含90%培養(yǎng)基+10%DMSO）重懸，按1mL/管分裝至凍存管。采用程序降溫盒（-1℃/min）或梯度降溫法，于-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
第六步：質(zhì)量監(jiān)控與污染防范
每日觀察細(xì)胞形態(tài)（應(yīng)呈長(zhǎng)梭形、成纖維細(xì)胞典型特征）、生長(zhǎng)狀態(tài)及有無(wú)微生物污染（渾濁、pH變化）。定期檢測(cè)細(xì)胞活力（臺(tái)盼藍(lán)染色）與支原體污染。
服務(wù)熱線：400-8822-003
更新時(shí)間：2025-10-16
點(diǎn)擊次數(shù)：159
關(guān)注公眾號(hào) 
當(dāng)前位置：
